第六届中国生物分析论坛年会CBF青年论坛报告简介第五期

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楼主 2018-11-08 12:33:07
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本期CBF生物分析公众号推出的第六届中国生物分析论坛年会CBF青年论坛的讲者,是来自成都华西海圻医药科技有限公司(国家成都新药安全性评价中心)临床检验分析部部长刘斌,本次参会报告的内容是在电化学发光免疫分析技术平台上的游离及结合型Fc融合蛋白药物的检测。


Fc融合蛋白游离及结合物生物分析方法建立及案例分析


Fc融合蛋白药物发展迅速,但对其药代动力学的分析却面临着挑战,其中分别对游离及结合型药物的定量检测仍是研究的难点。目前检测游离的蛋白药物浓度的方法主要还是酶联免疫吸附测定(ELISA),而对结合型检测方法鲜有报道。结合型药物的出现预示机体减少游离药物在体内的暴露,降低药效作用,还可能会引起体内免疫效应,如免疫复合物沉积。在药物研发阶段中对结合物的检测,既能准确反映体内靶点因子的表达水平,动态描述靶点因子与药物的结合过程,还能显示结合物的饱和程度,以全面评价药物的药理作用,并为临床制定安全的用药方案提供更合理的试验依据,因此对结合物的分析在药物研究中具有重要意义。

方法:本研究针对血管内皮生长因子受体Fc融合蛋白(VEGFR-Fc)药物,采用电化学发光免疫分析技术(MSD),建立分别检测体内游离和结合型Fc融合蛋白的生物分析方法(原理如下图所示),并进行了包括标准曲线与定量下限、精密度与准确度、选择性、特异行、稀释线性和“Hook”效应、平行性、稳定性的方法学验证。游离药物检测以重组人VEGF 165作为捕获抗体,以生物素标记抗人IgG抗体为检测抗体。结合物检测以抗人VEGF 165抗体作为捕获抗体,以生物素标记的抗人IgG抗体为检测抗体。以恒河猴单次玻璃体注射2.0 mg/眼的VEGFR-Fc融合蛋白药物为例,考察其药物在恒河猴体内游离与结合型的关系。

结果:游离药物检测线性范围为19.53~5000.00ng/mL,批内和批间精密度范围分别为1.3~14.9%和5.8~8.3%,批内和批间准确度范围分别为-8.0~10.5%和2.3~5.3%。结合药物检测线性范围为15.63~2000.00ng/mL,批内和批间精密度范围分别为1.5~8.1%和3.8~8.7%,批内和批间准确度范围分别为-12.4~20.0%和-2.1~10.8%。两个方法的相关系数均达到0.99,选择性和特异性良好。游离与结合型药物的达峰浓度分别为72和336h,半衰期分别为98和210 h,暴露量分别为802.5和589.2 h*μg/mL。

结论:建立的游离及结合物的生物分析方法重复性好,灵敏度高,方法的选择性、精密度、准确度、特异性以及稳定性和样本回收率均符合生物技术药物的方法学标准。恒河猴单次玻璃体注射VEGFR-Fc药物后,体内主要以游离药物的形式存在,且达峰时间更快,在达峰后会快速消除,而结合型药物在血药浓度达峰后,会保持一个比较稳定的水平,数天后才慢慢降低。对于结合型药物分析方法建立的关键点是高纯度标准品的获得,目前主要是利用基因重组技术制备。


报告人简介

刘斌,成都华西海圻医药科技有限公司(国家成都新药安全性评价中心,以下简称华西海圻)临床检验分析部部长。在湖北医科大学取得学士学位,四川大学获理学硕士学位。自2002年起一直从事新药临床前分析工作,现监管医学检验、大分子药物生物分析等工作。主导建立了部门文件体系和规范,完善了各种属实验动物临床病理学评价体系。带领实验室多次通过企业OECD/FDA/CFDA GLP检查及核查,临床检验分析部单独多次通过美国病理学家学会(CAP)/二级生物实验室过认证。共参加8项国家级、省部级课题,如“863”计划、国家重点科技攻关计划、国家自然科学基金重点课题等。发表文章2篇,参加编制专著1部,获授权发明专利2项。

刘斌所在团队为成都华西海圻医药科技有限公司(国家成都新药安评中心)。团队负责人为岑小波研究员,博士生导师,国家新药审评专家,从事药理毒理转化与前沿科学研究20余年。中心具备符合CFDA、FDA及OECD GLP要求的新药临床前研究能力,通过OECD GLP认证、国际AAALAC认证、美国CAP认证,ISO14000认证、CFDA GLP认证,并构建了LIMS实验数据管理系统。临床检验分析团队主要从事大分子生物药物的PK、TK、ADA分析,及试验动物血液、生化、免疫学试验样本的检测,目前团队有工作人员43人,核心技术人员具有一定的GLP工作经验。实验室配备的主要仪器设备均经过3Q验证并严格遵循GLP要求。





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