睿与凡生物细胞培养与检测服务项目

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楼主 2018-12-05 16:42:33
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细胞培养

代客户培养状态良好的细胞用于后续实验。负责将客户所购买的细胞冻存保种于本实验室,实验完成后客户可以要求回寄细胞。服务完成后,本公司免费为客户保存细胞3个月。

细胞转染(质粒/siRNA/miRNA)

采用瞬时转染的方法能够方便快捷地对基因功能进行研究与分析,且基因表达水平高,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。

服务流程

(1)预实验通过转染含有GFP报告基因的质粒或荧光标记的siRNA优化转染条件;

(2)转染条件确定后,按照客户方案进行转染;

(3)q-PCR或Western Blot检测转染效率。

稳定细胞株筛选

慢病毒感染方法较质粒转染筛选单克隆方法更方便和高效,是目前主流的稳定细胞系筛选方法。慢病毒几乎可以感染所有种类的细胞,并且在感染后可以整合到受感染细胞的基因组,进行长时间的稳定表达,因此,慢病毒常用于制备稳定表达/沉默特定基因的单克隆细胞株。

本公司构建包装的带嘌呤霉素抗性的慢病毒,在感染目的细胞后,可通过加入嘌呤霉素进行选择性筛选,从而获得稳定表达shRNA或者特定基因的细胞株。我们提供病毒包装服务(您可以自己完成稳态细胞筛选),或者一站式的稳定细胞系的筛选服务。

细胞增殖检测(MTT/CCK8)

四甲基偶氮唑盐比色法(MTT方法)是通过快速简便的颜色反应来检测细胞存活数量。其原理是MTT可作为哺乳类动物细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时,线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成蓝紫色的针状甲瓒(Formazan)结晶并沉积在细胞中,结晶物能被二甲基亚砜(DMSO)溶解,用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其吸光度OD值,OD值的高低可间接反映活细胞的数量及其活性。

CCK-8试剂中含有WST–8,它在电子载体的作用下被细胞线粒体中的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。和MTT法相比,CCK-8法检测灵敏度更高,产物更易溶解,检测结果更加稳定。


EdU细胞增殖检测

EdU(5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,但其连有的炔羟基团在天然化合物中很少见,在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中,基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析,可以有效地检测处于S期的细胞百分数。与传统的免疫荧光染色(BrdU)检测方法相比,更简单,更快速,更准确。EdU只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内更容易扩散,不需要严格的样品变性(酸解、热解、酶解)处理,有效地避免了样品损伤,有助于在组织、器官的整体水平上观测细胞增殖的真实情况,具有更高的灵敏度和更快的检测速度。


细胞划痕实验

细胞划痕实验(Wound Healing)是一种操作简单,经济实惠的研究细胞迁移/肿瘤侵袭的体外试验方法。这种方法的原理是,当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕”愈合。基本的步骤包括“划痕”的制造,细胞迁移期间图像的获得以及后期数据的处理。


Transwell 细胞迁移/侵袭实验

Transwell小室底层的一张有通透性的膜(一般为聚碳酸酯膜),将其放置于孔板中,小室内称上室,培养板内称下室。由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞。应用Transwell可研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。

服务内容

(1)细胞共培养:研究某一细胞分泌产物对另一细胞性能的影响;

(2)趋化实验:研究某一细胞分泌产物对另一细胞迁移的影响;

(3)肿瘤迁移实验:研究肿瘤细胞的迁移能力或特定情况下肿瘤细胞的迁移能力。


流式细胞检测

流式细胞技术是利用流式细胞仪(flow cytomerty,FCM)进行的一种单细胞定量分析和分选技术。流式细胞仪的工作原理是使悬浮在液体中的分散的经荧光标记的细胞或微粒逐个通过样品池,同时由荧光探测器捕获荧光信号并转化成为分别代表前向散射角、侧向散射角和不同荧光强度的电脉冲信号,经计算机处理形成相应的点图,直方图和三维结构图像进行分析。用于FCM的样品是单细胞悬液,可以是血液、悬浮细胞培养液、各种体液、新鲜实体瘤的单细胞悬浮液。

服务内容:

(1)细胞凋亡的检测与分析;

(2)DNA含量检测与细胞周期的分析;

(3)细胞增殖的检测与分析;

(4)细胞毒的检测与分析。



售前技术支持:186 2189 0481

邮件垂询:realfinebio@163.com


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